کارگاه کشت سلول (رده سلول سرطانی)

آموزشگاه ژن فن آوری اوژن (تکوین ) مفتخر است با در اختیار داشتن امکانات و تجهیزات آزمایشگاهی و فضای مناسب آموزشی و اساتید مجرب و باتجربه در زمینه آموزش کارآموزان و دانشجویان محترم کارگاه کشت سلول را برگزار کند.

ویژگی های این کارگاه:

تدریس عملی و تئوری مباحث

انجام تکنیک توسط خود کارآموز

ارائه مدرک معتبر

برگزاری کلاس ها به صورت نیمه خصوصی(۴ تا ۵ نفره)

كاربردهاي كشت سلول

شايد از خود سؤال كنيم كه چرا سلول ها را كشت مي دهيم؟

يكي از اهداف كشت سلولي مطالعه سلول ها از نظر نحوه رشد، نيازهاي غذايي و علـل توقـف رشد آنهاست. بنابراين براي مطالعه چرخه رشد سلولي، توسعه روش هاي كنترل رشد سـلولهاي سرطاني و تعديل بيان ژنها نياز به كشت اين سلول ها در محيط خارج بـدن مـي باشـد.
يكي ديگر از كاربردهاي كشت سلولي، مطالعة تكامل جانداران است. اينكه چگونه يك سـلول لقاح يافته مي تواند به جانداري پرسلولي تبديل شود كه هـر يـك از سـلول هـاي آن از نظـرمورفولوژي و خصوصيات ديگر با هم متفاوت باشند. براي پاسخ به اين سـؤال مـي تـوان ايـن سلول لقاح يافته را در محيط آزمايشگاهي كشت داد و مراحل مختلف تكامـل و تمـايز آن را بررسي نمود. با كمك كشت سلولي مي توان سلول هايي تهيه نمـود كـه در مراحـل مختلـف تمايز قرار دارند و به كمك هورمون ها و فاكتورهاي رشد مي توانند به سـلول هـاي ديگـري متمايز شوند. انجام بعضي از مطالعات ژنتيكي از جمله توليد حيوانات ترانس ژنيكي كه بتوانند ژنهاي خاصي را بيان كنند فقط با كمك تكنيك كشـت سـلولي امكـان پـذير اسـت. در ايـن از كشـت  مطالعات براي وارد كردن يك ژن بيگانه به داخل ژنوم سلول هاي بنيادي رويـاني سلولي استفاده مي شود. بعلاوه تكنولوژي ممزوج كردن سلول ها كـه عمـدتاً در توليـد آنتـي باديهاي مونوكلونال كاربرد دارد و همچنين انجام آزمايشات سـم شناسـي نيـاز بـه كشـت و نگهداري اين سلول ها در محيط آزمايشـگاهي دارد. واكسيناسـيون در مبـارزه بـا بيماريهـاي ويروسي حائز اهميت است و توسعه كشت سلولي تأثير بسزايي در توليد واكسن هاي ويروسي داشته است، بطوريكه امروزه توليد واكسنهاي ويروسي تخفيف حدت يافته منحصراً بـه كمـك كشت سلولي انجام مي پذيرد. تيره هاي سلول توليد شده از سلول هاي پوششي كليـه گـاو و از سلول هاي مهمي هستند كه كشت آنها به صورت استاندارد  سلول هاي پوششي كليه سگ درآمده و امروزه براي توليد واكسن هاي تخفيف حدت يافته ويروسي به كار مي روند. امروزه روش هاي مناسبي براي كشت اين سلول در محيط هاي فاقد سرم ايجاد شده است كه عـلاوه بر كاهش هزينه توليد واكسن باعث اطمينان از عدم آلـودگي آن بـا سـاير عوامـل عفـوني و كنترل صحيح شرايط توليد واكسن مي شود.

پاساژ سلولی  چیست؟

پاساژ سلولی یعنی کم کردن تراکم سلول‌های ظرف کشت به منظور تکثیر و حفظ بقای سلول‌های مورد نظر هست. این کار زمانی که جمعیت سلول های ظرف کشت به حداکثر خودشون می رسه انجام میشه. همونطوری که کاملا قابل پیش‌بینی هست؛ وقتی جمعیت سلول‌های ظرف کشت؛ به حداکثر خودشون برسه؛ و اصطلاحا سلول‌ها کانفلوئنت بشن؛ سلول‌ها کم کم رو به پیری خواهند رفت و بعد از مدتی هم دچار آپاپتوز میشن. این اتفاق بخاطر افزایش تدریجی متابولیت‌های سمی و اتمام مواد غذایی موجود در محیط کشت انجام می‌شه؛ مواد حاصله از سلول‌های مرده؛ باعث تاثیر بر بقیه سلول‌ها و حتی مرگ اونها هم خواهد شد. بنابراین برای داشتن سلول‌هایی زنده و سرحال! احتیاج داریم همیشه تراکم مناسبی از سلول‌های مورد نظر رو در ظرف کشت داشته باشیم؛‌ چه برای شروع کشت؛ و چه در انتهایی رشد سلول‌ها که قصد برداشت کردن سلول‌ها رو داریم. هر نوع سلولی؛ تراکم های مطلوب و بهینه مربوط به خودش رو دارد

شمارش سلول

روش‌های متعددی در زیست‌شناسی و پزشکی نیازمند شمارش سلول هستند. با شمارش سلول‌ها در یک حجم کوچک، غلظت می‌تواند تعیین شود. مثال‌هایی که نیاز به شمارش سلول دارند شامل:

• در پزشکی، غلظت سلول‌های مختلف خونی، مانند سلول‌های قرمز خون و سلول‌های سفید خون، می‌تواند اطلاعات حیاتی در مورد وضعیت سلامتی شخص به ما بدهد (ببینید: شمارش کامل خون).
• در سلول درمانی، برای کنترل دوز سلول‌های تجویز شده برای بیمار.
• به‌طور مشابه، غلظت باکتری، ویروس‌ها و دیگر عوامل بیماری‌زا در خون یا دیگر سیالات بدن می‌تواند اطلاعاتی دربارهٔ پیشرفت یک بیماری عفونی و همچنین اطلاعاتی دربارهٔ موفقیت سیستم ایمنی در مهار عفونت را فراهم کند.
• در آزمایشات زیست‌شناسی مولوکولی نیاز است تا غلظت سلول مشخص شود، تا طبق آن مقدار عوامل شیمیایی و واکنش دهنده در آزمایش اعمال شوند.
• مطالعاتی که نرخ رشد میکروارگانیسم‌ها را آزمایش می‌کنند (به عبارت دیگر: چه زمانی نیاز هست تا آن‌ها سلول‌های جدید را ایجاد کنند)، نیازمند شمارش سلول هستند.
• اندازه‌گیری میزان زنده بودن سلول، یعنی اندازه‌گیری و محاسبه نسبت سلول‌های مرده به سلول‌های زنده، برای مثال سلول‌هایی که در معرض سم قرار گرفته‌اند.

• استفاده از لام هموسیتومتر که با نام لام نئوبار نیز شناخته می شود برای شمارش سلول ها است . در آغاز طراحی آن در رابطه با شمارش سلول های خونی بوده است . لام هموسیتومتر به وسیله ی لوئیز – چارلز مالاسز اختراع شده و از یک اسلاید میکروسکوپی شیشه ای ضخیم به همراه کنگره های مستطیلی شکل ، تشکیل شده که یک محفظه را به وجود می آورد .این محفظه با ساختار توری مانندی از خطوط عمودی حک شده که شکل گیری آن ها به وسیله ی لیزر بوده است . ساخت این دستگاه با دقت خاصی بوده تا به واسطه ی آن حدود خطوط معین و عمق دستگاه نیز مشخص باشد . در نتیجه احتمال شمارش تعداد سلول ها یا ذرات در حجم مشخصی از مایع ، و در نتیجه محاسبه ی غلظت سلول ها در کل مایع امری شدنی است .

• اصول کار با لام هموسیتومتر

• ناحیه ی توری مانند ( شبکه ای ) هموسیتومتر شامل ۹ مربع به ابعاد ۱ در ۱ میلی متر ( ۱ mm2) است . این مربع در سه جهت تقسیم می شوند یعنی : ۰٫۲۵ در ۰٫۲۵ میلی متر ( ۰٫۰۶۲۵ میلی متر ) و ۰٫۲۰ در ۰٫۲۰ میلی متر ( ۰٫۰۴ mm2 ) . مربع مرکزی خود به مربع های ۰٫۰۵ در ۰٫۰۵ میلی متر ( ۰٫۰۰۲۵ mm2 ) تقسیم می شود . لبه های بالا آمده ی لام هموسیتومتر سبب می شود که لامل ۰٫۱ میلی متر از شبکه ی علامت گذاری شده دور باشد ، که همین باعث می شود که هر مربع حجم معین شده ای داشته باشد ( عکس سمت راست را مشاهده کنید ) .

• نحوه ی استفاده از لام هموسیتومتر

برای استفاده از لام هموسیتومتر ، در آغاز این اطمینان را داشته باشد که لامل ویژه ی تهیه شده با محفظه ی شمارش به خوبی در سطح محفظه ی شمارش قرار گرفته است . هنگامی که دو سطح شیشه ای تماس مناسبی با هم دارند می شود حلقه های نیوتنی را مشاهده کرد . اگر این قضیه صدق داشت ، سوسپانسیون سلولی استفاده شده در لبه ی لامل به درون خلاء به وسیله ی عمل موئین کشیده می شود که به شکل کامل محفظه را با نمونه پر می کند . تعداد سلول ها در محفظه را می شود به وسیله ی شمارش مستقیم با استفاده از یک میکروسکوپ محاسبه کرد و سلول هایی که به صورت بصری قابل تمیز دادن می باشند را می شود به صورت متفاوتی مورد شمارش قرار داد . تعداد سلول ها درون محفظه برای محاسبه ی غلظت یا تراکم سلول ها ، درون مخلوطی که نمونه از آن گرفته شده ، استفاده می شود . میزان آن برابر است با تعداد سلول ها در محفظه بخش بر حجم محفظه ، که مقدار آن از همان ابتدا معلوم است.